無(wú)菌室一般是在微生物實(shí)驗(yàn)室內(nèi)專辟一個(gè)小房間。可以用板材和玻璃建造。面積不宜過(guò)大，約 4 — 5 平方米即可，高 2.5米左右。無(wú)菌室外要設(shè)一個(gè)緩沖間，緩沖間的門(mén)和無(wú)菌室的門(mén)不要朝向同一方向，以免氣流帶進(jìn)雜菌。無(wú)菌室和緩沖間都必須密閉。室內(nèi)裝備的換氣設(shè)備必須有空氣過(guò)濾裝置。
無(wú)菌室標(biāo)準(zhǔn)化規(guī)程與驗(yàn)收規(guī)范。
1.目的
本規(guī)程旨在為無(wú)菌操作及無(wú)菌室的保護(hù)一個(gè)標(biāo)準(zhǔn)化規(guī)程。
2.適用范圍
生測(cè)實(shí)驗(yàn)室
3.責(zé)任者
QC主管生測(cè)員
4.定義
無(wú)
5.安全注意事項(xiàng)
嚴(yán)格無(wú)菌操作，防止微生物污染；操作人員進(jìn)入無(wú)菌室應(yīng)先關(guān)掉紫外燈。
6.規(guī)程
6.1.無(wú)菌室應(yīng)設(shè)有無(wú)菌操作間和緩沖間，無(wú)菌操作間潔凈度應(yīng)達(dá)到10000級(jí)，室內(nèi)溫度保持在20-24℃，濕度保持在45-60%。凈臺(tái)潔凈度應(yīng)達(dá)到100級(jí)。
6.2.無(wú)菌室應(yīng)保持清潔，嚴(yán)禁堆放雜物，以防污染。
6.3.嚴(yán)防一切滅菌器材和培養(yǎng)基污染，已污染者應(yīng)停止使用。
6.4.無(wú)菌室應(yīng)備有工作濃度的消毒液，如5％的甲酚溶液，70％的酒精，0.1％的新潔爾滅溶液，等等。
6.5.無(wú)菌室應(yīng)定期用適宜的消毒液滅菌清潔，以保證無(wú)菌室的潔凈度符合要求。
6.6.需要帶入無(wú)菌室使用的儀器，器械，平皿等一切物品，均應(yīng)包扎嚴(yán)密，并應(yīng)經(jīng)過(guò)適宜的方法滅菌。
6.7.工作人員進(jìn)入無(wú)菌室前，必須用肥皂或消毒液洗手消毒，然后在緩沖間更換工作服，鞋，帽子，口罩和手套（或用70%的乙醇再次擦拭雙手），方可進(jìn)入無(wú)菌室進(jìn)行操作。
6.8.無(wú)菌室使用前必須打開(kāi)無(wú)菌室的紫外燈輻照滅菌30分鐘以上，并且同時(shí)打開(kāi)凈臺(tái)進(jìn)行吹風(fēng)。操作完畢，應(yīng)及時(shí)清理無(wú)菌室，再用紫外燈輻照滅菌20分鐘。
6.9.供試品在檢查前，應(yīng)保持外包裝完整，不得開(kāi)啟，以防污染。檢查前，用70％的酒精棉球消毒外表面。
6.10.每次操作過(guò)程中，均應(yīng)做陰性對(duì)照，以檢查無(wú)菌操作的可靠性。
6 .11.吸取菌液時(shí)，必須用吸耳球吸取，切勿直接用口接觸吸管。
6.12.接種針每次使用前后，必須通過(guò)火焰灼燒滅菌，待冷卻后，方可接種培養(yǎng)物。
6.13.帶有菌液的吸管，試管，培養(yǎng)皿等器皿應(yīng)浸泡在盛有5%來(lái)蘇爾溶液的消毒桶內(nèi)消毒，24小時(shí)后取出沖洗。
6.14.如有菌液灑在桌上或地上，應(yīng)立即用5%石碳酸溶液或3％的來(lái)蘇爾傾覆在被污染處至少30分鐘，再做處理。工作衣帽等受到菌液污染時(shí)，應(yīng)立即脫去，高壓蒸汽滅菌后洗滌。
6.15.凡帶有活菌的物品，必須經(jīng)消毒后，才能在水下沖洗，嚴(yán)禁污染下水道。
6.16.無(wú)菌室應(yīng)每月檢查菌落數(shù)。在凈工作臺(tái)開(kāi)啟的狀態(tài)下，取內(nèi)徑90mm的無(wú)菌培養(yǎng)皿若干，無(wú)菌操作分別注入融化并冷卻至約45℃的營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基約15ml，放至凝固后，倒置于30～35℃培養(yǎng)箱培養(yǎng)48小時(shí)，證明無(wú)菌后，取平板3～5個(gè)，分別放置工作位置的左中右等處，開(kāi)蓋暴露30分鐘后，倒置于30～35℃培養(yǎng)箱培養(yǎng)48小時(shí)，取出檢查。100級(jí)潔凈區(qū)平板雜菌數(shù)平均不得過(guò)1個(gè)菌落，10000級(jí)潔凈室平均不得過(guò)3個(gè)菌落。如過(guò)限度，應(yīng)對(duì)無(wú)菌室進(jìn)行消毒，直至重復(fù)檢查合乎要求為止。
